怎么检测狗狗弓形虫？

2019年5月最新更新答主是学兽医的，虽然毕业好几年，可是看到这个问题还是忍不住来回答一下~~ 首先我们来了解一下这个弓形虫病（简称“弓虫病”）是什么吧~！弓形虫病又称弓形菌病或弓浆虫感染，是由刚地弓形虫寄生引起的一种人畜共患传染病，可累及脑、肝等多脏器，临床表现多种多样，从轻微无症状到严重疾病，甚至死亡[1]。人类对弓形虫普遍易感，由于免疫力差异，人群中的患病率约为17%~60% [2][3]，而孕妇的发病率高达80%～90%。目前弓形体病的诊断方法主要包括病原学检查与血清学试验。但是，上述检查方法均存在着一定的缺陷和不足之处。因此，迫切需要一种快速、灵敏、特异而且简便易行的检测技术作为辅助手段. 本篇主要介绍两种较为常见的弓形虫的检测方式，分别是PCR技术和ELISA技术！

一、 PCR技术 PCR（Polymerase chain reaction）即聚合酶链式反应。是一种建立在DNA复制基础上的体外扩增技术，其原理是根据DNA双链解旋后各单链可沿各自模板顺向延伸的特性，在引物存在时利用引物和DNA模板合成互补链，以扩增特定的DNA片段。 PCR技术具有敏感性高、特异性强等优点，且操作简便、快速，易于实现自动化和分析鉴定自动化，因而成为目前应用最多的分子生物学实验技术之一，在微生物学领域被广泛应用。目前用于弓形虫感染的PCR引物主要有4对，它们分别是SGA-F/R、SGB-F/R、T3/T4 和GST-L/R，其中以SGA-F/R 和 SGB-F/R 为常用引物[4]，

我们实验室一般用该PCR引物进行弓形虫的PCR检测。在PCR检测之前要进行以下几个步骤准备：

①提取模板DNA；②配置PCR试剂；③调整PCR反应液浓度和体积；④设置好PCR扩增仪程序参数并预热仪器。具体操作流程如下所示👇

二、 ELISA技术在免疫诊断中，最常用的方法是酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay， EIA) ，它是在抗体与抗原免疫结合的基础上发展起来的一类新的免疫学分析技术，具有敏感、快速、简便等特点，是目前最为成熟的抗体定量方法之一。其基本原理是将被检测样品中的待测成分与酶标记抗体的复合物在固相载体表面发生特异性反应，洗涤去除非结合物质，再加入底物显色，根据显色程度判定被测物含量[5]。下面我们以羊弓形虫为例介绍一下弓形虫的ELISA检测流程哦~

三、检测结果判读一般来说ELISA检测的结果呈阴性为正常，呈阳性则需要进一步确诊。而对于PCR结果而言则可分为五个等级：

四、注意事项由于PCR技术的敏感性极强，在进行PCR检测时，需要特别注意防止假阳性现象的发生。所以在具体操作过程中一定要严格按照操作手册来进行，比如核酸提取时，需严格控制在核酸蛋白检测仪检测OD260/280值在1.8~2.0之间；核酸纯化时，要根据情况选择合适的核酸纯化试剂盒进行纯化。对于使用ELISA方法的检测结果来说也是一样的，同样需要注意假阴性和假阳性的检出。所以我们在做检测时一定要严格把控好每一个环节，这样才能得到一个准确可靠的检测结果！小结：不管是运用哪种检测方式来检测弓形虫，都需要严格遵循操作规程哟❤️

最后希望这篇文章能帮到你！欢迎补充指正噢❤

参考文献： [1]张丽敏，王燕萍，陈静波，李岩，杨永峰.弓形虫病的研究进展[J].中国微生态学杂志，2007(05)：399-401+357-358. [2]郑洪.弓形虫病诊治研究概况[J].国外医学寄生虫学分册，1991(02)：67-70. [3]吴秀英.弓形虫病检测新进展[J].国际医学检验，2003(02)：31-33. [4]胡梅，彭晓云，袁林飞，徐明芳，刘雪松.弓形虫感染患者的临床特征及PCR检测结果分析[J].华西医学，2015，30(05)：966-969. [5]肖淑兰.兔弓形虫病的研究现状与展望[J].江西农业大学学报，2006(04)： 395-398